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常見(jiàn)的融合蛋白表達(dá)標(biāo)簽——總結(jié)

在重組蛋白中，常常將目的蛋白N端或C端與其他特定蛋白、多肽或寡肽標(biāo)簽進(jìn)行融合表達(dá)，形成既能保留天然蛋白的大部分結(jié)構(gòu)，又能實(shí)現(xiàn)增溶，防降解，促進(jìn)分泌，便于純化的功能；本文簡(jiǎn)要介紹生物藥研發(fā)生產(chǎn)過(guò)程中常見(jiàn)的融合蛋白標(biāo)簽；一、純化標(biāo)簽His標(biāo)簽His標(biāo)簽是當(dāng)前流行的標(biāo)簽蛋白。His標(biāo)簽是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當(dāng)某一個(gè)標(biāo)簽的使用，一是能構(gòu)成表位利于檢測(cè)；二是構(gòu)成*的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。其特點(diǎn)可總結(jié)為以下幾點(diǎn)：1.標(biāo)簽的分子量小，只...

技術(shù)服務(wù) 抗體測(cè)序服務(wù)

艾柏森生物科技有限公司作為值得信賴的抗體研發(fā)服務(wù)供應(yīng)商，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，可為客戶提供的抗體測(cè)序服務(wù)。艾柏森生物打造的全新一代抗體測(cè)序平臺(tái)，基于蔦槍法與抗體數(shù)據(jù)庫(kù)相結(jié)合的技術(shù)“DatabaseAssistedShotgunSequencing”（DASS）技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)還適用于其他亞型和不同形式的抗體，如：IGM，熒光偶聯(lián)抗體，固定化抗體，不同物種的抗體等。等重氨基酸測(cè)序與其它基于MS測(cè)序方法不同的是，我們可以分辨大多數(shù)等重氨基酸復(fù)合物★W可與GE、AD、SV區(qū)分★R可從G...

技術(shù)服務(wù) X-射線晶體學(xué)

技術(shù)介紹：X-射線分辨單克隆抗體-抗原復(fù)合物是分析單克隆抗體識(shí)別表位的可靠方法，該方法基于對(duì)單克隆抗體-抗原共晶體衍射的X-射線束的強(qiáng)度和角度測(cè)量，再用生物信息學(xué)的方法確定原子坐標(biāo)，將復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)完整可視化?？乖砦环治鰧?duì)抗體人源化改造，抗體親和力提高，抗體穩(wěn)定性改造，發(fā)現(xiàn)新的功能表位，改變抗體特異性，設(shè)計(jì)新抗體，基于抗原－抗體相互作用的立體構(gòu)型設(shè)計(jì)新型功能分子改造抗體都很重要。應(yīng)用該方法首先需獲得純度較高的抗原、抗體，并使其相互作用形成共晶，但由于成本及技術(shù)要求較高，難...

技術(shù)服務(wù) 酵母雙雜交篩選服務(wù)

蛋白的酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)是以酵母的遺傳分析為基礎(chǔ)，研究蛋白間相互作用的一種有效技術(shù)手段。轉(zhuǎn)錄活化蛋白可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由其上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域，即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(BindingDomain,BD)和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(ActivationDomain,AD)共同完成的。以Gal4系統(tǒng)為例，BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域(1-147aa與768-881aa)構(gòu)成。在利用GAL4系統(tǒng)篩選cDNA文庫(kù)或...

技術(shù)服務(wù) 熒光原位雜交FISH

熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,按照堿基互補(bǔ)的原則直接雜交結(jié)合到待檢測(cè)染色體或單鏈核酸上，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。進(jìn)行定性、定位、相對(duì)定量分析。FISH技術(shù)優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、結(jié)果易觀察、可檢測(cè)多種類樣品、空間定位準(zhǔn)確、靈敏性和特異性高FISH臨床意義：指導(dǎo)臨床治療及藥物選擇、疾病的分期分型及預(yù)后判斷、形態(tài)學(xué)檢測(cè)的輔助手段熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟FIS...

技術(shù)服務(wù) 原位雜交ISH

原理簡(jiǎn)介：原位雜交技術(shù)（insituhybridization）是以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè)，從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。可以檢測(cè)cRNA、miRNA、LnRNA、DNA?？梢愿鞣N種屬的標(biāo)本，包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。注：為了提高檢測(cè)的成功率，請(qǐng)?jiān)?..

制備單克隆有方法有哪些？

艾柏森生物科技有限公司目前制備大量單克隆抗體的方法主要有兩種：一種是動(dòng)物體內(nèi)誘生法；另一種是體外培養(yǎng)法。背景BACKGROUND困惑PUZZLED體外培養(yǎng)法有哪幾種培養(yǎng)方式？何謂無(wú)血清培養(yǎng)？探索在體外培養(yǎng)法中,目前各個(gè)實(shí)驗(yàn)室普遍采用細(xì)胞單層法,就是將雜交瘤細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶中，用*培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞濃度以1.0X100~2.0X106個(gè)/mL為宜，然后收集培養(yǎng)上清液。如果希望在體外高效率地大量制備單克隆抗體，就必須高密度培養(yǎng)單克隆抗體細(xì)胞株，充分利用培養(yǎng)基的立體空間。單位體積內(nèi)細(xì)胞...

技術(shù)服務(wù) 膜蛋白抗體制備服務(wù)

對(duì)于絕大多數(shù)的可溶性蛋白抗原，我們可以制備全長(zhǎng)的蛋白抗原以免疫動(dòng)物制備抗體，但是對(duì)于那些依托雙脂層膜結(jié)構(gòu)建立起來(lái)的多次跨膜蛋白，抗體的制備就沒(méi)那么簡(jiǎn)單了。比如G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）蛋白就是一個(gè)典型的大型、多次跨膜的重要蛋白家族，它是許多疾病的病理信號(hào)參與者，同時(shí)也是近一半現(xiàn)代藥物的作用靶點(diǎn)。然而要想制備GPCR的抗體確實(shí)非常困難，這主要有兩方面因素造成，一是眾多的跨膜區(qū)間造成蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)被分割成彼此間隔在細(xì)胞膜內(nèi)外兩側(cè)的多個(gè)區(qū)域，而人為去掉這些結(jié)構(gòu)則會(huì)造成蛋白構(gòu)象喪失原...