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噬菌體篩選分離技術(shù)你知道怎么做嗎?

更新時間:2021-01-14點(diǎn)擊次數(shù):2062
   噬菌體篩選對理化因素的抵御力比普通細(xì)菌的繁殖體強(qiáng),個別經(jīng)75℃30分鐘以上才失去活性,對紫外線敏感。噬菌體是侵襲微生物的病毒,可沾染細(xì)菌、真菌、螺旋體和支原體等。噬菌體只借居于易感宿主菌體內(nèi),故可用于細(xì)菌的鑒定和分型。噬菌體結(jié)構(gòu)簡單,基因數(shù)量少,其宿主細(xì)胞易于培育,是基因工程和分子生物學(xué)研討的主要工具。噬菌體存在病毒的生物學(xué)特點(diǎn),即個體渺小,構(gòu)造簡略,只含有一種核酸DNA或RNA,只能在活的細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方法進(jìn)行滋生。噬菌體有蝌蚪形、球形和細(xì)桿狀3種狀態(tài)。多數(shù)噬菌體呈蝌蚪形,由頭部和尾部組成。頭部衣殼跟尾部的化學(xué)組成是蛋白質(zhì),頭部衣殼內(nèi)存有噬菌體的遺傳物質(zhì)核酸DNA或RNA,尾部有能辨認(rèn)宿主菌細(xì)胞名義的特別受體,與噬菌體吸附有關(guān)。
  噬菌體的分離技術(shù)試驗(yàn):
  1.制備菌懸液:取大腸桿菌斜面一支,加4ml無菌水洗下菌苔,制成菌懸液。
  2.增殖培養(yǎng):于100ml三倍濃縮的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角燒瓶中,加入污水樣品200ml與大腸桿菌懸液2ml,37℃培養(yǎng)12-24小時。
  3.制備裂解液:將以上混合培養(yǎng)液2500r/min離心15分鐘。將以滅菌的蔡氏過濾器用無菌操作安裝于滅菌抽濾瓶上,用橡皮管連接抽濾瓶與安全瓶,安全瓶再連接于真空泵。將離心上清夜倒入濾器,開動真空泵,過濾除菌。所得濾液倒入滅菌三角瓶內(nèi),37℃培養(yǎng)過夜,以作無菌檢查。
  4.確證試驗(yàn)
  經(jīng)無菌檢查沒有細(xì)菌生長的濾液作進(jìn)一步證明噬菌體的存在。
  ①于肉膏蛋白胨瓊脂平板上加一滴大腸桿菌懸液,再用滅菌玻璃涂布器將菌液涂布成均勻的一薄層;
  ②待平板菌液干后,分散滴加數(shù)小滴濾液于平板菌層上面,里37℃培養(yǎng)過夜。如果在滴加濾液處形成無菌生長的透明噬菌斑,便證明濾液中有大腸桿菌噬菌體。
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